小鼠肺组织解离试剂盒

(Mouse Lung Tissue Dissociation Kit)

产品目录号：TM009

规格：12T/盒

目录

1.说明

1.1.背景信息

1.2.试剂盒组成

1.3.试剂耗材及仪器

2. 试验处理步骤

1. 说明

1.1.背景信息

在短时间内高效获得高质量的单细胞悬液，是诸多细胞相关后续实验的先决条件。小鼠肺组织j解离试剂盒（Mouse Lung Tissue Dissociation Kit)结合SoniConvert®单细胞悬液制备系统可快速获得高纯度、高产量和高活性单细胞悬液。小鼠肺组织解离剂中的有效化学试剂成分可对细胞间质打孔，使解离酶接触表面积加大从而达到快速解离组织目的；再配合SoniConvert®单细胞悬液制备系统多向力场的作用原理，快速将细胞从组织上揉取分离。

 本品作为特定组织解离试剂盒已被开发应用于从小鼠肺组织中获得单个细胞，能够在短时间内快速获得高质量的单细胞悬液。

1.2试剂盒组成

小鼠肺组织解离试剂盒

（Mouse Lung Tissue Dissociation Kit）

1.3 所需试剂耗材及仪器

Ø  小鼠肺组织解离试剂盒；

Ø  SoniConvert®单细胞悬液制备系统;

Ø  37℃恒温摇床；

Ø  低温水平离心机；

Ø  1.5mL EP 管，50mL离心管；

Ø  40-70μm滤网；

Ø  D-Hanks；

Ø  红细胞裂解液； 

2.组织单细胞化处理步骤

▲ SoniConvert®单细胞悬液制备系统详细使用步骤请参考仪器操作使用说明书。

▲用于原代细胞培养实验，以下操作步骤均需在无菌条件下进行。

▲加入小鼠肺组织解离剂后，放置于37℃恒温摇床孵育时转速控制在60转以下；

2.1 组织解离器具准备，清洁消毒；

2.2 无菌条件下取出组织；

2.3 将离体组织转移至含预冷的D-Hanks平皿中，采用预冷的D-Hanks清洗组织1-3次（视组织含血量而定），使用无菌眼科剪剔除看得见的血管、结缔组织、纤维成分、凝块等，该操作全程于冰上进行；

2.4 取清洗后的组织50-150mg（根据所需细胞量决定组织用量）转移至1.5mL 无菌的EP管中，加入800μL组织松解缓冲液（Buffer-1），置于冰上；

2.5 使用无菌眼科剪，将组织剪碎成2mm3左右的小组织块；

2.6 加入小鼠肺组织解离剂（ML-Type Solution）200μL，反复颠倒混匀10s；

2.7 将EP管放到37℃恒温摇床解离软化，期间摇床以60转/分钟震荡，每隔两分钟取出颠倒混匀10秒，孵育时间控制在5-10min。

2.8 将步骤2.7EP管中上清液取出转移至2.11滤网上过滤，向原EP管加入600μL的Buffer-1；

2.9 将解离后的小鼠肺组织，针对沉降组织：采用SoniConvert®单细胞悬液制备系统进行揉取处理，选择处理模式，将探头深入至管底与组织接触缓慢上下搅动组织块，持续3-9秒，70%以上组织块被解离、或彻底消失，如果组织块用量大于100mg，可重复该步骤1次。

*注意：肺部组织由于密度低出现漂浮情况，解离后，将消融探头靠近漂浮组织，并将其温和推入1.5ml EP管底，按住“启动键”不放，同时用消融探头缓慢上下搅动组织块，持续3-9s，至70%以上组织块被解离、或彻底消失，如果组织块用量大于100mg，可重复该步骤1次。

2.10（可选）依据处理组织后的粘稠情况，视情况加入200μL解离缓冲液（Buffer-2），混匀处理5min

2.11 将解离后的单细胞悬液采用滤网（依据细胞大小选择40-70μm滤网）过滤至无菌50mL离心管中。

2.12 加入5mL预冷的D-Hanks溶液冲洗滤网至步骤2.10中的50mL离心管中，4℃ 500g离心5min，去除上清；

2.13（可选）根据实验是否需要去除红细胞，将红细胞裂解液加入细胞沉淀中混匀处理5min；

2.14 4℃ 500g离心5min，弃上清；

2.15 加入500-1000μL细胞保护液（Buffer-3）重悬；

2.16 用细胞计数板或全自动细胞计数器对细胞计数，根据需求用细胞保护缓冲液（Buffer-3）或PBS(PH:7.4)调整细胞浓度至1×105至1×107个/mL。