大鼠脂肪组织解离试剂盒

(Rat Fat Tissues Dissociation Kit)

产品目录号：TR008

规格：12T/盒

目录

1.说明

1.1.背景信息

1.2.试剂盒组成

1.3.试剂耗材及仪器

2.试验处理步骤

1. 说明

1.1背景信息

如何在短时间内高效获得高质量的单细胞悬液是诸多后续实验的先决条件。大鼠脂肪组织解离试剂盒（Rat Fat Tissues Dissociation Kit）结合SoniConvert®单细胞悬液制备系统可快速高产地获得高纯度和高活性的脂肪单细胞悬液。大鼠脂肪组织解离剂中的有效化学试剂成分可对细胞间质进行打孔，使解离酶的接触表面积增大，达到快速解离组织目的。再配合SoniConvert®单细胞悬液制备系统形成多向力场，并基于流体力学作用原理，快速将细胞从组织上柔取分离，最终实现在无菌条件下快速制备单细胞悬液的目的。

本品作为特定组织解离试剂盒已应用于从大鼠脂肪组织中获得单个细胞，能在短时间获得高质量的活性单细胞悬液。

1.2试剂盒组成

大鼠脂肪组织解离试剂盒

（Rat Fat Tissues Dissociation Kit）

1.3所需试剂耗材及仪器

Ø  大鼠脂肪组织消融试剂盒；

Ø  SoniConvert®单细胞悬液制备系统;

Ø  37℃恒温摇床；

Ø  低温水平离心机；

Ø  1.5mL EP 管，50mL离心管；

Ø  40-70μm滤网；

Ø  D-Hanks；

Ø  红细胞裂解液；

Ø  生理盐水。

2.组织单细胞化处理步骤

▲ SoniConvert®单细胞悬液制备系统详细使用步骤请参考仪器操作使用说明书。

▲用于原代细胞培养实验，以下操作步骤均需在无菌条件下进行。

▲加入大鼠脂肪组织解离剂后，放置于37℃恒温摇床孵育时转速控制在60转以下；

2.1 组织解离器具准备，清洁消毒；

2.2 无菌条件下取出组织；

2.3 将离体组织转移至含预冷的D-Hanks平皿中，采用预冷的D-Hanks清洗组织1-3次（视组织含血量而定），使用无菌眼科剪剔除看得见的血管、结缔组织、纤维成分、血凝块等，该操作全程于冰上进行；

2.4 取清洗后的组织50-150mg（根据所需细胞量决定组织用量）转移至1.5mL 无菌EP管中，加入800μL组织洗涤缓冲液（Buffer-1），置于冰上；

2.5 使用无菌眼科剪，将组织剪碎成2mm3左右的小组织块；

2.6 加入大鼠脂肪组织解离剂（RF-Type Solution）200μL，反复颠倒混匀10s；

2.7 将EP管放到37℃恒温摇床解离软化，期间摇床以60转/分钟震荡，每隔2分钟取出颠倒混匀10s，处理时间控制5min内；

2.8 将解离后的大鼠脂肪组织采用SoniConvert®单细胞悬液制备系统进行揉取处理，选择处理模式，将探头深入至管底与组织接触缓慢上下搅动组织块，持续3-9s，至70%以上组织块被解离或彻底消失；

2.9  将解离后的单细胞悬液采用滤网（选择100μm滤网）过滤至无菌50mL离心管中；

2.10 加入5mL预冷的生理盐水溶液或D-Hanks冲洗滤网至步骤2.9中的50mL离心管中，4℃500g离心5min，因为脂肪细胞特殊性，白脂肪细胞浮于液体表面，脂肪干细胞及脂肪前体细胞存于管底，故弃液时吸头需深入白脂肪细胞层下吸取中间液体；

2.11（可选）根据实验是否需要去除红细胞，将红细胞裂解液加入细胞沉淀中混匀处理5min；4℃ 500g离心5min，弃上清（白脂肪细胞下层的中间液体）

2.12 加入200-1000μL大鼠脂肪组织细胞保护缓冲液（Buffer-3）重悬；

2.13 用细胞计数板或全自动细胞计数器对细胞计数，根据需求用细胞保护缓冲液（Buffer-3）或PBS(PH:7.4)调整细胞浓度至1×105至1×107个/mL。