动物组织，细胞总 RNA 提取试剂盒

(Total RNA Extraction Kit for Animal Tissues and Cells )

产品目录号：RP001，RP002，RP003

产品内容 

产品介绍 

本产品由试剂 A 和试剂 B 组成。动物组织、细胞保存于试剂 A 中，可以确保室温放置 24 小时而保证 RNA 不降解。

试剂 A 和试剂 B 按 1:1 比例混合后，具有更强的裂解能力，能够充分裂解样本、溶解细胞内含物，有效提取样本中的总 RNA，

同时保证了提取过程中 RNA 的完整性。本品可用于小量样品（2-10mg 组织、0.1-1× 106细胞）的总 RNA 提取，适用于动物组织和细胞样本，30min 内即可完成反应。

经本品提取的总 RNA 最大限度的消除了 DNA和蛋白等杂质的污染，可用于 NorthernBlot、DotBlot、Poly A 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆。

储存条件

该试剂盒置于室温（15-25℃），干燥条件下，可保存 12 个月，更长时间的保存可置于 2-8℃。

2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在 37℃水浴中预热 10min，以溶解沉淀。

注意事项 

首次使用时请仔细阅读注意事项。

1. 第一次使用前应按标签需要添加格外成分。 

2. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取过程产生不可预计后果。 

3. 观察各种试剂中是否有析出或沉淀，若有，可以室温放置半小时后摇匀使用。

预防 RNase 污染，应注意以下几方面：

1．经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致 RNase 污染。

2．使用 RNase-Free 的塑料制品和枪头避免交叉污染。 

3．提取后继续处理过程中应使用 RNase-Free 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可 在 150℃烘烤 4h，塑料器皿可在 0.5MNaOH中浸泡 10 min，然后用水彻底清 洗，再灭菌，即可 去除 RNase。 

4．配制溶液应使用 RNase-Free ddH2O。 

RNA 提取操作步骤

试剂准备：Docsence SolutionA，Docsence SolutionB，氯仿，异丙醇，70% 乙醇（RNase-Free ddH2O 配制），RNase-Free ddH2O

1. 取 500μ L SolutionA 加入 1.5mL EP 管中； 

2. 离心后细胞沉淀（0.1-1× 106个细胞）或采用组织取样器获取目的组织 （2-10 mg，最适用量为 5mg），放入已加好 SolutionA 的 EP 管（样本 可保存于 SolutionA 中，也可以即刻提取）；

*注：浸没于 500μL SolutionA 中的组织、细胞可以在室温放置 24h，或者在-20℃中长期保存，保证 RNA 不降解。

3. 提取：向 SolutionA 保护的组织或细胞中加入 500μ L SolutionB，颠倒混匀，获得混合物； 

4. 从组织中提取 RNA 时，将步骤 3 得到的混合物采用组织消融仪进行消融处理，操作步骤如下： 

4.1. 将组织消融仪连接上电源，1.5mL EP 管放入配制的载架上； 

4.2. 将组织消融仪探头深入到间距 EP 管底 3mm处，勿使探头贴近底 部或者管壁； 

4.3. 选取对应组织配套对应的参数（如肝脏脾脏肾脏肺部肿瘤：选择 参数 1；肌肉神经等组织：选择参数 2；脑部等：选择参数 3）， 进行组织消融； 

4.4. 将消融后的混合物颠倒混匀； 

5. 在步骤 3 从细胞提取 RNA 的混合物或步骤 4 的混合物中，加入 200μL 氯仿，颠倒混匀 20 次，混匀后采用 12000rpm离心 2min，或取上层液体 600μL 于新 EP 管，（做好标注）；

6. 在上层液体中加入等量体积的异丙醇，颠倒混匀 20 次，混匀后采用12000rpm离心 8min，弃去液体，获得沉淀物； 

7. 向沉淀物中加入1mL 70%乙醇溶液，使用移液器悬浮沉淀后离心，采用12000rpm离心 2min，弃去液体； 

8. 再次向沉淀物中加入1mL 70%乙醇溶液，使用移液器悬浮沉淀后离心，采用 12000rpm离心 2min，弃去液体，保证液体不惨留； 

9. 晾干至沉淀透明； 

10.向晾干的沉淀物中加入100-150μL 灭菌 RNase-Free ddH2O溶解； 

11.采用分光光光度计测 RNA 浓度，跑胶鉴定，在用于下游实验。